پاڼه_بینر

خبرونه

د ریښتیني وخت فلوروسینس مقداري Pcr اصول تخنیکونه او غوښتنلیکونه

د ریښتیني وخت فلوروسینس مقداري PCR د فلوروفور په کارولو سره د DNA امپلیفیکیشن عکس العمل کې د هر پولیمیریز چین عکس العمل (PCR) دورې وروسته د محصول ټول مقدار اندازه کولو میتود دی.دا میتود په نمونه کې د ځانګړي DNA ترتیبونو مقدار کولو لپاره کارول کیږي ترڅو د داخلي یا بهرنۍ حوالې میتودونو لخوا ازمول کیږي.د هغې له پیل راهیسې، د فلوروسینټ کمیتي PCR ارزونه د لابراتوار ښوونکو سره په زیاتیدونکي توګه مشهور شوي.

د فلوروسینس PCR اصول: فلوروسینس PCR چې لومړی د TaqManPCR په نوم یادیږي او وروسته د ریښتیني وختPCR په نوم هم یادیږي، د نیوکلیک اسید مقدار کولو نوی تخنیک دی چې په 1995 کې په متحده ایالاتو کې د PE (PerkinElmer) لخوا رامینځته شوی. دا تخنیک د فلوروسینټ لیبل شوي تحقیقات یا اړونده اضافه کولو پراساس دی. دودیز PCR ته فلوروسینټ رنګ د دې کمیتي فعالیت ترلاسه کولو لپاره.اصول: لکه څنګه چې د PCR عکس العمل پرمخ ځي، د PCR عکس العمل محصولات راټولیږي او د فلوروسینټ سیګنال شدت په مساوي تناسب کې وده کوي.د هر دورې سره، د فلوروسینس شدت سیګنال راټولیږي ترڅو موږ د فلوروسینس شدت کې بدلون له لارې د محصول مقدار کې بدلون وڅیړو او پدې توګه د فلوروسینس امپلیفیکیشن وکر ګراف ترلاسه کړو.

د ریښتیني وخت فلوروسینس 3
د ریښتیني وخت فلوروسینس 2

په عموم کې ، د فلوروسینس امپلیفیکیشن وکر په دریو مرحلو ویشل کیدی شي: د فلوروسینس شالید سیګنال مرحله ، د فلوروسینس سیګنال exponential amplification مرحله او د پلوټو مرحله.د شالید سیګنال مرحلې په جریان کې ، پراخه فلوروسینس سیګنال د فلوروسینس شالید سیګنال لخوا پوښل شوی او د محصول مقدار کې بدلون نشي ټاکل کیدی.د پلیتو په مرحله کې، د امپلیفیکیشن محصول نور په چټکۍ سره نه زیاتیږي، د پای محصول مقدار او د پیل شوي ټیمپلیټ مقدار ترمنځ هیڅ خطي اړیکه شتون نلري، او د پیل شوي DNA کاپي شمیره د وروستي PCR محصول مقدار پراساس نشي محاسبه کیدی.یوازې د فلوروسینټ سیګنال د توضیحي امپلیفیکیشن مرحلې کې د PCR محصول مقدار لوګاریتم او د پیل شوي ټیمپلیټ مقدار ترمینځ خطي اړیکه شتون لري ، او موږ کولی شو پدې مرحله کې دا مقدار وټاکو.د مقدار او پرتله کولو اسانتیا لپاره، دوه خورا مهم مفکورې د ریښتیني وخت فلوروسینټ کمیتي PCR تخنیک کې معرفي شوي: د فلوروسینس حد او د CT ارزښت.

حد د فلوروسینس امپلیفیکیشن وکر کې په مصنوعي ډول ټاکل شوی ارزښت دی.د PCR امپلیفیکیشن کفایتي مرحله.

د Ct ارزښت: د سایکلونو شمیر دی چې په هر عکس العمل ټیوب کې د فلوروسینس سیګنال د ټاکل شوي ډومین ارزښت ته رسیدو لپاره تیر شوی.

د Ct ارزښت او د پیل شوي ټیمپلیټ ترمنځ اړیکه: مطالعې ښودلې چې د هرې کینډۍ د Ct ارزښت د دې ټیمپلیټ د پیل شوي کاپي شمیرې لوګاریتم سره خطي اړیکه لري، د پیل شوي کاپي شمیرې ډیرې کاپي، د Ct کوچنۍ. ارزښتد Ct ارزښتونه نسبتا باثباته دي.یو معیاري وکر د پیژندل شوي پیل شوي کاپي شمیرې سره د معیار په کارولو سره رامینځته کیدی شي ، چیرې چې افقی همغږي د پیل شوي کاپي شمیرې لوګاریتم څرګندوي او عمودی همغږي د Ct ارزښت څرګندوي لکه څنګه چې لاندې عکس کې ښودل شوي.

له همدې امله، د نامعلومې نمونې د Ct ارزښت په ترلاسه کولو سره، د دې نمونې د پیل شوي کاپي شمیره د معیاري وکر څخه محاسبه کیدی شي.

د Ct ارزښت ثابت نه دی او د مختلف نمونو او مختلف وسیلو لخوا اغیزمن کیدی شي، حتی که ورته نمونه په ورته وسیله کې 2 ځله تکرار شي، د Ct ارزښت توپیر کولی شي.

د کمیتي فلوروسینس ارزونه: د کمیتي فلوروسینس ارزونه د کارول شوي مارکرونو پراساس په فلوروسینټ پروبونو او فلوروسینټ رنګونو ویشل کیدی شي.د فلوروسینټ پروبونو کې د بیکون ټیکنالوژي (د مالیکولر بیکون ټیکنالوژي چې د امریکایی ټاګی لخوا نمایندګي کیږي)، د تاقمان تحقیقات (د ABI لخوا استازیتوب کیږي) او د FRET ټیکنالوژي (د روچ لخوا نمایندګي) شامل دي؛د فلوروسینټ رنګونو کې سنتر شوي فلوروسینټ رنګونه او غیر سنتر شوي فلوروسینټ رنګونه شامل دي، د غیر سنتر شوي فلوروسینټ رنګونو ځانګړی استازی SYBRGreen I دی، چې اوس په عام ډول کارول کیږي؛saturated د غیر سنتر شوي فلوروسینټ رنګونو ځانګړی استازی SYBRGreenⅠ دی؛سنتر شوي فلوروسینټ رنګونه EvaGreen، LCGreen، او نور دي.

SYBRGreenI د فلوروسینټ PCR لپاره په عام ډول کارول کیږي د DNA پابند رنګ دی، کوم چې په غیر مشخص ډول د دوه اړخیزه DNA سره تړلی دی.په خپل آزاد حالت کې، SYBRGreenI یو کمزوری فلوروسینس خپروي، مګر یوځل چې دوه ځله تړل شوي DNA پورې تړلی وي، د هغې فلوروسینس 1000 چنده زیاتیږي.له همدې امله، د عکس العمل لخوا خارج شوي ټول فلوروسینس سیګنال د موجود دوه ګونی ډنډ شوي DNA مقدار سره متناسب دی او د امپلیفیکیشن محصول لوړیدو سره وده کوي.

د ډبل سټنډ شوي DNA پابند رنګونو ګټې: ساده تجرباتي ډیزاین ، یوازې 2 پریمرونو ته اړتیا لري ، د تحقیقاتو ډیزاین کولو ته اړتیا نلري ، د ډیری جینونو ګړندي ازموینې لپاره ډیری تحقیقات ډیزاین کولو ته اړتیا نلري ، د خټکي نقطې منحني تحلیل ترسره کولو وړتیا ، د ځانګړتیاو ازموینه د پراخولو عکس العمل، ټیټ ابتدايي لګښت، ښه عموميیت او له همدې امله په کور دننه او بهر په څیړنو کې ډیر کارول کیږي.

د فلوروسینټ پروب میتود (تقمان تخنیک): کله چې د PCR امپلیفیکیشن ترسره کیږي ، د پریمرونو یوه جوړه د ځانګړي فلوروسینټ تحقیقات سره اضافه کیږي.کله چې تحقیقات ثابت وي، د راپور ورکوونکي ګروپ لخوا خارج شوي فلوروسینس سیګنال د شنډ شوي ګروپ لخوا جذب کیږي او د PCR وسیلې لخوا نه کشف کیږي؛د PCR امپلیفیکیشن (د تمدید په مرحله کې)، د Taq انزایم د 5'-3' cleavage فعالیت په انزایمیک ډول د تحقیقاتو تخریب کوي، د راپور ورکوونکي فلوروسینس ګروپ او د quenched fluorescence ګروپ جوړوي.

د فلوروسینټ کمیتي PCR غوښتنلیکونه.

د مالیکول بیولوژی څیړنه:

1. د نیوکلیک اسید مقداري تحلیل.د ساري ناروغیو کمیتي او کیفیتي تحلیل، د ناروغیو مایکرو ارګانیزمونو یا ویروسونو کشف، لکه د وروستي انفلونزا A (H1N1) ناروغي، د ټرانسجینک نباتاتو او حیواناتو د جین کاپي شمیره کشف کول، د RNAi جین غیر فعال کیدو نرخ کشف کول، او داسې نور.

2. د جین څرګندولو توپیر تحلیل.د درملنې نمونو ترمنځ د جین بیان توپیرونو پرتله کول (د بیلګې په توګه د مخدره توکو درملنه، فزیکي درملنه، کیمیاوي درملنه، او نور)، په مختلفو مرحلو کې د ځانګړو جینونو د بیان توپیر او د cDNA مایکروری یا د توپیر بیان پایلې تایید

3. د SNP کشف.د واحد نیوکلیوټایډ پولیمورفیزم کشف کول د مختلفو ناروغیو په وړاندې د انفرادي حساسیت یا ځانګړو درملو لپاره د انفرادي غبرګون مطالعې لپاره مهم دي، او د مالیکولر بیکونونو د هوښیار جوړښت له امله، کله چې د SNP ترتیب معلومات معلوم شي، دا اسانه او سمه ده. دا تخنیک د لوړې کچې SNP کشف لپاره وکاروئ.

4. د میتیلیشن کشف.میتیلیشن د ډیری انساني ناروغیو سره تړاو لري، په ځانګړې توګه سرطان، او لیرډ د میتیلایټ په نوم یو تخنیک راپور کړ، کوم چې د انډول کولو دمخه د DNA درملنه کوي ترڅو غیر میتیلیټ سایټوسین یوریکیل شي او میتیل شوي سایټوسین غیر اغیزمنه وي، د ځانګړو پریمرونو او تاقمان تحقیقاتو په کارولو سره د میتیلیټ او DNA ترمنځ توپیر کوي. .ډیر حساس.

طبي څیړنه:

1. د زیږون دمخه تشخیص: خلک نشي کولی د بدلیدونکي جینیاتي موادو له امله رامینځته شوي میراثي ناروغیو درملنه وکړي ، او تر دې دمه دوی یوازې د زیږون څخه دمخه د څارنې له لارې د زیږیدلو ناروغانو شمیر کمولی شي ترڅو د مختلف میراثي ناروغیو پیښې مخه ونیسي.دا یو غیر انتفاعي میتود دی چې د امیندواره میرمنو لخوا په اسانۍ سره منل کیږي.

2. د پیتوجین کشف: د فلوروسینټ کمیتي PCR ارزونه اجازه ورکوي چې د ناروغیو کمیتي تعیین کړي لکه ګونوکوکس، کلیمیډیا ټراکوماتیس، مایکوپلازما سولیم، هیومن پاپیلوما ویروس، د هیرپس ​​سمپلیکس ویروس، د انسان معافیت ویروس، هیپاتیتس سیمپلیکس ویروس، مایکوبیروسیم ویروس، انفلوکوکوس، انفلوکوکوس، او.دا د دودیزو ازموینو میتودونو په پرتله د لوړ حساسیت ، ټیټ نمونې اندازې ، ګړندیتوب او سادگي ګټې لري.

3. د مخدره توکو د اغیزمنتیا ارزونه: د هیپاتیت بی ویروس (HBV) او د هیپاتیت سی ویروس (HCV) کمیتی تحلیل ښیې چې د ویروس بار او د ځینو درملو اغیزمنتوب ترمنځ اړیکه.که چیرې د HBV-DNA د سیروم کچه د لامیوډین درملنې په جریان کې کمه شي او بیا بیا لوړه شي یا د پخوانۍ کچې څخه لوړه شي، دا د ویروس د بدلون نښه ده.

4. Oncogenetic testing: که څه هم د تومور د پراختیا میکانیزم لا تر اوسه روښانه نه دی، دا په پراخه توګه منل شوي چې په اړونده جینونو کې بدلونونه د آنکوجنیک بدلون اصلي لامل دی.د آنکوجینز زیاتوالی او بدلون د ډیری تومورونو په لومړیو مرحلو کې لیدل کیدی شي.د ریښتیني وخت فلوروسینس مقداري PCR نه یوازې په جینونو کې د تغیراتو په موندلو کې مؤثره دی ، بلکه کولی شي د آنکوجینز څرګندونه په دقیق ډول کشف کړي.دا میتود د مختلف جینونو څرګندولو لپاره کارول شوی پشمول د telomerase hTERT جین، د اوږدمهاله ګرانولوسیټیک لیوکیمیا WT1 جین، آنکوجینک ER جین، د پروستات سرطان PSM جین، او د تومور پورې تړلي ویروس جینونه.

د www.DeepL.com/Translator سره ژباړل شوی (وړیا نسخه)


د پوسټ وخت: جون 21-2022